雙鴨山市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè)
發(fā)布時(shí)間：2024-12-23 01:01:18
雙鴨山市實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè)
動(dòng)物疫病包括動(dòng)物傳染病、寄生蟲(chóng)病。動(dòng)物傳染病，即由病原體侵入動(dòng)物體內(nèi)，使動(dòng)物產(chǎn)生具有一定潛伏期和臨床癥狀并具有傳播性 的動(dòng)物疫病，如口蹄疫、雞瘟、牛肺疫、炭疽、布魯氏菌病、狂 犬病等。動(dòng)物寄生蟲(chóng)病，即由寄生蟲(chóng)寄生在動(dòng)物體內(nèi)或體表引起 的疾病，如豬囊蟲(chóng)病、旋毛蟲(chóng)病、鉤端螺旋體病、血吸蟲(chóng)病、疥瞞等。根據(jù)動(dòng)物疫病對(duì)養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)和人體健康的危害程度，我國(guó)還 將動(dòng)物疫病分為下列三類(lèi)：對(duì)人畜危害嚴(yán)重、需要采取緊急、嚴(yán) 厲的強(qiáng)制預(yù)防、控制、撲滅措施的為一類(lèi)疫?。豢稍斐芍卮蠼?jīng)濟(jì) 損失、需要采取嚴(yán)格控制、撲滅措施，防止疫情擴(kuò)散的為二類(lèi)疫 ??；常見(jiàn)多發(fā)、可能造成重大經(jīng)濟(jì)損失、需要控制和凈化的為三 類(lèi)疫病。
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傳染病流行過(guò)程的三:個(gè)基本環(huán)節(jié):①傳染源。即傳染來(lái)源，就是被感染的動(dòng)物，包括傳染病病畜禽和帶菌(毒)動(dòng)物，如潛伏期帶菌(毒)、病愈后帶菌(毒)及健康動(dòng)物帶菌(毒)等。②傳播方式和途徑。有直接接觸傳播及間接接觸傳播。③易感動(dòng)物。就是對(duì)某種傳染病的病原體有易感性的動(dòng)物。
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大部分分子診斷實(shí)驗(yàn)室的核心技術(shù)都主要集中在檢測(cè)特異性、相對(duì)較短的DNA或RNA片段上。該技術(shù)能診斷傳染性疾病、鑒別影響藥物代謝的特殊基因變異型或檢測(cè)與疾病有關(guān)的基因，如與癌癥有關(guān)的基因。這些檢測(cè)的核心是實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)擴(kuò)增（TMA）、靶向擴(kuò)增和信號(hào)擴(kuò)增等類(lèi)似技術(shù)的應(yīng)用。桑格排序和DNA片段分析或采用毛細(xì)電泳法的凝膠法都是分子診斷實(shí)驗(yàn)室的關(guān)鍵技術(shù)，但他們通常還包括檢測(cè)過(guò)程中的擴(kuò)增步驟。為了能順利應(yīng)用那些采用DNA和RNA來(lái)診斷疾病的檢測(cè)，分子診斷實(shí)驗(yàn)室須要使用定義明確的工作流程，從而得到穩(wěn)定的、有效的結(jié)果，而當(dāng)前已存在能幫助診斷實(shí)驗(yàn)室實(shí)現(xiàn)每個(gè)工作流程流水化的特殊工具。
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Taq DNA聚合酶具有很高的加工合成特性，在適反應(yīng)溫度時(shí)，dNTP的摻入速度為35～100 nt/（s．酶分子），擴(kuò)增長(zhǎng)度可達(dá)7.6 kb。在低溫條件下，Taq DNA聚合酶的活性明顯降低，導(dǎo)致此酶在模板內(nèi)局部二級(jí)結(jié)構(gòu)區(qū)域的延伸能力受阻或前進(jìn)速率常數(shù)與解離常數(shù)的比值發(fā)生改變。在較高的溫度（95℃以上）時(shí)，很少有DNA合成；在體外，DNA在較高溫度時(shí)的合成速度受到引物或引物鏈與模板鏈雙鏈結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的限制。由于Taq DNA聚合酶的適反應(yīng)溫度高達(dá)75～80℃，故退火溫度和延伸溫度均可適當(dāng)提高，這限制了非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的出現(xiàn)，增加了PCR反應(yīng)的特異性。
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常用的動(dòng)物檢疫方法:常用的動(dòng)物檢疫方法有臨床檢查、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)等方法。臨床檢查方法主要看動(dòng)物的表現(xiàn)(靜、動(dòng)、臥、起、立、精神、食欲等)是否正常，體溫、脈搏、呼吸等是否在正常生理指標(biāo)范圍內(nèi)。實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)則依照農(nóng)業(yè)部頒布的動(dòng)物檢疫操作規(guī)程規(guī)定的檢疫方法和判定標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。①產(chǎn)地檢疫。是指動(dòng)物離開(kāi)飼養(yǎng)產(chǎn)地之前的檢疫。②屠宰檢疫。是指在宰前、宰后及屠宰過(guò)程中，對(duì)動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品所實(shí)施的檢疫。包括宰前檢疫②屠宰檢疫。是指在宰前、宰后及屠宰過(guò)程中，對(duì)動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品所實(shí)施的檢疫。包括宰前檢疫和宰后檢疫兩個(gè)環(huán)節(jié)。③檢疫證明。是指檢疫機(jī)關(guān)給檢疫合格的動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品出具的法律書(shū)證?，F(xiàn)行農(nóng)業(yè)部統(tǒng)一監(jiān)制、發(fā)放和使用的檢疫證明包括《動(dòng)物檢疫合格證明》、《動(dòng)物產(chǎn)品檢疫合格證明》、《出縣境動(dòng)物檢疫合格證明》、《出縣境動(dòng)物產(chǎn)品檢疫合格證明》和《動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品運(yùn)載工具消毒證明》5種。
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常規(guī)普通PCR常見(jiàn)問(wèn)題：1. 優(yōu)化反應(yīng)條件，梯度摸索退火溫度，延長(zhǎng)退火延伸時(shí)間，增加反應(yīng)循環(huán)數(shù)（30-45區(qū)間為宜）。2. 對(duì)核酸模板進(jìn)行純化，或使用商業(yè)化核酸提取試劑盒進(jìn)行提取，增加核酸模板的上樣量。3. 優(yōu)化反應(yīng)體系（預(yù)混體系除外），改變檢測(cè)體系中的Mg2+濃度及dNTPs用量，更換體系中Buffer。4. 重新設(shè)計(jì)引物，避免引物二聚體和鏈內(nèi)二級(jí)結(jié)構(gòu)，在一次稀釋引物后可分裝成多支小管，減少反復(fù)凍融次數(shù)。