齊齊哈爾市分子診斷試劑原材料研發(fā)
發(fā)布時間：2024-12-24 01:01:15
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分子診斷是當代醫(yī)學發(fā)展的重要前沿領域之一，其核心技術是基因診斷，常規(guī)技術包括：（1）聚合酶鏈式反應（PCR）；（2）DNA測序（DNA sequencing）；（3）熒光原位雜交技術（FISH）；（4）DNA印跡技術（ DNA blotting ）；（5）單核苷酸多態(tài)性（SNP）；（6）連接酶鏈反應（LCR）；（7）基因芯片技術（gene chip）。
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在PCR反應早期，產生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別，而后熒光的產生進入指數期、線性期和終的平臺期，因此可以在PCR反應處于指數期的某一點 上來檢測PCR產物的量，并且由此來推斷模板初的含量。為了便于對所檢測樣本進行比較，在real-time Q-PCR反應的指數期，首先需設定一定熒光信號的域值，一般這個域值（threshold）是以PCR反應的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號 （baseline），熒光域值的缺省設置是3～15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍。如果檢測到熒光信號超過域值被認為是真 正的信號，它可用于定義 樣本的域值循環(huán)數（Ct）。Ct值的含義是：每個反應管內的熒光信號達到設定的域值時所經歷的循環(huán)數。研究表明，每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的 對數存在線性關系，起始拷貝數越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線，因此只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標準曲線上計算出該樣 品的起始拷貝數。
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化驗室診斷方法- -般采用的檢測依據為國家標準、農業(yè)標準，其次是有關動物疫病檢測的其它技術規(guī)程、規(guī)范等，還可以采用化驗室自行設定的檢測方法。應結合化驗室條件及樣品類型等因素來選擇合適的方法。例如，化驗室需診斷偽狂犬病，如果沒有基因擴增儀，但有酶標儀，就可以采用酶聯免疫吸附試驗診斷，而不必用聚合酶鏈反應試驗診斷。使用化驗室自行設定的檢驗方法要慎重,因為，一該檢驗方法是否正確有待驗證;二如果將來有爭議.上訴法院，會有較大的麻煩。
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Taq酶的酶動力與擴增效率有關。一般熱啟動Taq酶的酶動力越強，PCR擴增的指數增長期越長，‘S型’曲線更加典型，熒光信號值更高，而且更適合做多重PCR檢測。我們曾比較過多家公司的熱啟動Taq酶，在國外品牌中，英國Bioline公司的熱啟動Taq酶，酶動力較好，可做4重PCR，等量起始模板CT30時的熒光信號值高。在國內品牌中，BIOG熱啟動Taq酶的指數期較長，可做3重PCR，且擴增曲線的‘S’型不受影響，其它的國產品牌一般只能支持2重反應，在做3重反應時，擴增曲線低矮，熒光信號值較低，無典型擴增曲線，結果很難判定。
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PCR產品占據分子診斷的主要市場，基因芯片是分子診斷市場發(fā)展的主要趨勢。PCR產品靈敏度高、特異性強、診斷窗口期短，可進行定性、定量檢測，可廣泛用于肝炎、性病、肺感染性疾病、優(yōu)生優(yōu)育、遺傳病基因、腫瘤等，填補了早期免疫檢測窗口期的檢測空白，為早期診斷、早期治療、安 全用血提供了有效的幫助?；蛐酒欠肿由飳W、微電子、計算機等多學科結合的結晶，綜合了多種現代高精尖技術，被專家譽為診斷行業(yè)產品。但其成本高、開發(fā)難度大，產品種類很少，只用于科研和藥物篩選等用途。
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人們生活水平不斷提升,對食品質量安 全提出更高的要求,檢疫工作不斷深入與完善,僅依靠感觀檢查已遠不能滿足當今工作的需要,須使病理化驗室發(fā)揮的作用.為更好地配合產地檢疫,屠宰檢疫及農貿市場的肉食品檢疫,根據《動物防疫法》,《食品衛(wèi)生法》,《定點屠宰管理辦法》及相關法律法規(guī)的精神,結合實際工作需要,高度重視動物的防疫工作.而動物疫病的診斷離不開先進的技術和設備,該文主要圍繞動物疫病診斷化驗室操作中常見的問題進行分析.