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滄州市實時熒光定量PCR儀廠家

發(fā)布時間:2025-01-01 01:01:24
滄州市實時熒光定量PCR儀廠家

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Taq DNA聚合酶具有很高的加工合成特性,在適反應溫度時,dNTP的摻入速度為35~100 nt/(s.酶分子),擴增長度可達7.6 kb。在低溫條件下,Taq DNA聚合酶的活性明顯降低,導致此酶在模板內(nèi)局部二級結(jié)構(gòu)區(qū)域的延伸能力受阻或前進速率常數(shù)與解離常數(shù)的比值發(fā)生改變。在較高的溫度(95℃以上)時,很少有DNA合成;在體外,DNA在較高溫度時的合成速度受到引物或引物鏈與模板鏈雙鏈結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的限制。由于Taq DNA聚合酶的適反應溫度高達75~80℃,故退火溫度和延伸溫度均可適當提高,這限制了非特異性擴增產(chǎn)物的出現(xiàn),增加了PCR反應的特異性。

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動物疫病包括動物傳染病、寄生蟲病。動物傳染病,即由病原體侵入動物體內(nèi),使動物產(chǎn)生具有一定潛伏期和臨床癥狀并具有傳播性 的動物疫病,如口蹄疫、雞瘟、牛肺疫、炭疽、布魯氏菌病、狂 犬病等。動物寄生蟲病,即由寄生蟲寄生在動物體內(nèi)或體表引起 的疾病,如豬囊蟲病、旋毛蟲病、鉤端螺旋體病、血吸蟲病、疥瞞等。根據(jù)動物疫病對養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)和人體健康的危害程度,我國還 將動物疫病分為下列三類:對人畜危害嚴重、需要采取緊急、嚴 厲的強制預防、控制、撲滅措施的為一類疫??;可造成重大經(jīng)濟 損失、需要采取嚴格控制、撲滅措施,防止疫情擴散的為二類疫 ?。怀R姸喟l(fā)、可能造成重大經(jīng)濟損失、需要控制和凈化的為三 類疫病。

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化驗室診斷方法- -般采用的檢測依據(jù)為國家標準、農(nóng)業(yè)標準,其次是有關(guān)動物疫病檢測的其它技術(shù)規(guī)程、規(guī)范等,還可以采用化驗室自行設(shè)定的檢測方法。應結(jié)合化驗室條件及樣品類型等因素來選擇合適的方法。例如,化驗室需診斷偽狂犬病,如果沒有基因擴增儀,但有酶標儀,就可以采用酶聯(lián)免疫吸附試驗診斷,而不必用聚合酶鏈反應試驗診斷。使用化驗室自行設(shè)定的檢驗方法要慎重,因為,一該檢驗方法是否正確有待驗證;二如果將來有爭議.上訴法院,會有較大的麻煩。

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化驗室診斷方法采用的檢測依據(jù)有以下幾種:①國家標準以及農(nóng)業(yè)標準;②動物疫病檢測的其他規(guī)范:③化驗室自行設(shè)定的檢測方法。不管采用何種方法,都需要考慮化驗室自身的條件及樣品類型,如在對偽狂犬病進行診斷時,實驗室有酶標儀,沒有基因擴增儀,在診斷時檢測人員可采用酶聯(lián)免疫吸附試驗進行診斷。如果送檢樣品為血清,檢測人員則可以采用酶聯(lián)吸附試驗,而不需要采用動物接種試驗與病毒分離鑒定方法。

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分子診斷的主要技術(shù)有核酸分子雜交、聚合酶鏈反應和生物芯片技術(shù)。1.核酸分子雜交技術(shù) 具有一定互補序列和核苷酸單鏈在液相或固相中按堿基互補配對原則締合成異質(zhì)雙鏈的過程,稱為核酸分子雜交。雜交的雙方是待測核酸序列和探針序列。應用該技術(shù)可對特定DNA或RNA序列進行定性或定量檢測。2.聚合酶鏈反應(即Polymerase chain reaction,PCR)原理:PCR是模板DNA,引物和四種脫氧核糖核昔三磷酸(dNTP)在DNA聚合酶作用下發(fā)生酶促聚合反應,擴增出所需目的DNA。包括三個基本步驟:雙鏈DNA模板加熱變性成單鏈(變性);在低溫下引物與單鏈DNA互補配對(退火);在適宜溫度下TapDNA聚合酶催化引物沿著模板DNA延伸。3.生物芯片技術(shù)是近年發(fā)展起來的分子生物學與微電子技術(shù)相結(jié)合的核酸分析檢測技術(shù)。起初的生物芯片技術(shù)主要目標是用于DNA序列測定、基因表達譜鑒定和基因突變體檢測和分析,所以又稱為DNA芯片或基因芯片技術(shù)。由于這一技術(shù)已擴展至免疫反應、受體結(jié)合等非核酸領(lǐng)域,出現(xiàn)了蛋白質(zhì)芯片、免疫芯片、細胞芯片、組織芯片等,所以改稱生物芯片技術(shù)更符合發(fā)展趨勢。