瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒

（離心柱型）

貨號(hào)：DP101A               規(guī)格：100T/200T                 保存：室溫

產(chǎn)品說(shuō)明：

本試劑盒采用可以高效、專(zhuān)一結(jié)合的DNA硅基質(zhì)材料和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，從TAE或TBE瓊脂糖凝膠上回收DNA片段，同時(shí)除去蛋白質(zhì)、其他有機(jī)化合物、無(wú)機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)。使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測(cè)序、文庫(kù)篩選、連接和轉(zhuǎn)化等試驗(yàn)。

產(chǎn)品組成：

儲(chǔ)存條件：

該試劑盒置于室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存12個(gè)月，更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時(shí)間，必要時(shí)可在37℃水浴10min，以溶解沉淀。

操作步驟：

1. 瓊脂糖凝膠電泳后，將單一的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余部分），放入干凈的離心管中，稱(chēng)取重量。

2. 向膠塊中加入等體積溶膠液（如果凝膠重為0.1g，其體積可視為100μL，則加入100μL溶膠液），50℃水浴放置，期間不斷溫和地上下翻轉(zhuǎn)離心管，以確保膠塊充分溶解。如果還有未溶的膠塊，可繼續(xù)放置幾分鐘或再補(bǔ)加溶膠液直至膠塊完全溶解。（若膠塊的體積過(guò)大，可事先將膠塊切成碎塊）

注意：回收小于300bp的小DNA片段時(shí)，建議在加入溶膠液完全溶膠以后，再加入1/2膠塊體積的異丙醇以提高DNA片段回收率；膠塊完全溶解后，最好將膠溶液溫度降至室溫再上柱，因?yàn)槲街谳^高溫度時(shí)結(jié)合DNA的能力較弱。

3. 將上一步所得溶液加入一個(gè)吸附柱中（吸附柱放入收集管中），室溫放置2min，12000rpm離心30-60sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放入收集管中。

注意：吸附柱的容積為800μL，如果樣品體積大于800μL可以分批加入。

4. 向吸附柱中加入600μL漂洗液（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12000rpm離心30-60sec，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

注意：如果回收的DNA片段是用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)，例如平末端連接實(shí)驗(yàn)或直接測(cè)序，建議加入漂洗液后靜置2-5min再離心。

5. 重復(fù)操作步驟4。

6. 將吸附柱放入收集管中，12000rpm離心2min，盡量除盡漂洗液。將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘，徹底晾干，防止殘留的漂洗液影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

7. 將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加適量洗脫液，室溫放置2min，12000rpm離心2min收集DNA溶液。

注意：

1）為了增加回收效率，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，室溫放置2min，12000rpm再次離心2min收集DNA溶液。

2）洗脫緩沖液體積應(yīng)不少于30μL，體積過(guò)小影響回收效率。

3）洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響，若用ddH₂O做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5之間。

8. DNA產(chǎn)物-20℃保存。

注意事項(xiàng)（在使用本試劑盒前請(qǐng)閱讀此注意事項(xiàng)）：

1. 電泳前最好更換成新的電泳緩沖液，如下一步實(shí)驗(yàn)要求較高，則應(yīng)盡量使用TAE電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。

2. 如溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時(shí)間，必要時(shí)可在37℃水浴中預(yù)熱適當(dāng)時(shí)間，以溶解沉淀。

3. 本試劑盒為保證回收效率及純度，建議瓊脂糖凝膠電泳時(shí)上樣體積不低于50μL；切膠時(shí)，紫外照射時(shí)間應(yīng)盡量短，以免對(duì)DNA造成損傷。

4. 當(dāng)回收片段過(guò)小或過(guò)大、瓊脂糖凝膠電泳上樣體積低于50μL時(shí)，建議選擇DP101B；回收小于100bp和大于10kb的DNA片段時(shí)，應(yīng)加大溶膠液的體積，延長(zhǎng)吸附和洗脫的時(shí)間。

5. 回收率與初始DNA量和洗脫體積有關(guān)，初始量越少、洗脫體積越小，回收率越低。

DP101三獅瓊脂糖DNA膠回收劑盒說(shuō)明書(shū)2201-A.pdf