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如何選擇熱啟動Taq酶

2022-04-20 15:58:59

 熱啟動Taq酶應用較廣,與普通Taq酶相比,熱啟動Taq酶能有效避免一些非特異擴增和引物二聚體的形成,能有效提高目標基因的擴增成功率。特別在基因檢測領域,熱啟動Taq酶已被確定為行業(yè)強制性標準,普通Taq酶不得使用。以上可見,熱啟動Taq酶應用非常廣泛。面對這么多的熱啟動Taq酶產(chǎn)品,我們應如何選擇?

熱啟動Taq酶

選擇擴增效率高的熱啟動Taq酶。PCR擴增效率與Taq酶的性能密切相關,好的Taq酶反應體系經(jīng)優(yōu)化后,擴增效率在95%以上,起始模板量擴增范圍寬。在目標基因含量較低時能夠獲得滿意的擴增,在模板量較高時,也不易中毒,指數(shù)擴增期較長。而性能較差的Taq酶,即使反應體系經(jīng)多次優(yōu)化,擴增效率仍達不到90%,擴增曲線“S”型不明顯,斜率較小,曲線低平。模板量較低時擴增不出來,較高時擴增效果也不理想。因而,選擇高擴增效率的Taq酶對PCR、qPCR能否成功是否重要。我們實驗室對國內常用的幾家公司的熱啟動Taq酶曾經(jīng)進行過比較,將GAPDH質粒5倍梯度稀釋,將qPCR結果做成標準曲線,結果ABI和BIOG熱啟動Taq酶擴增效率都在95%以上,每反應體積能夠檢測的低量可達2pg,而某國際知名品牌T的熱啟動Taq酶的擴增效率只有90%,在模板量為2pg時無擴增曲線。

選擇酶動力強的熱啟動Taq酶。Taq酶的酶動力與擴增效率有關。一般熱啟動Taq酶的酶動力越強,PCR擴增的指數(shù)增長期越長,‘S型’曲線更加典型,熒光信號值更高,而且更適合做多重PCR檢測。我們曾比較過多家公司的熱啟動Taq酶,在國外品牌中,英國Bioline公司的熱啟動Taq酶(Immulase)酶動力較好,可做4重PCR,等量起始模板CT30時的熒光信號值高。在國內品牌中,BIOG熱啟動Taq酶的指數(shù)期較長,可做3重PCR,且擴增曲線的‘S’型不受影響,其它的國產(chǎn)品牌一般只能支持2重反應,在做3重反應時,擴增曲線低矮,熒光信號值較低,無典型擴增曲線,結果很難判定。

選擇靈敏度高的熱啟動Taq酶。一般說,Taq酶的擴增效率高,靈敏度就高,但也有不一致的情況。如果要擴增的樣本目標基因豐度較低,建議對Taq酶的擴增靈敏度進行檢測。常見的檢測方法是將目標基因質粒片段進行10倍或5倍梯度稀釋,在較低的幾個稀釋度進行PCR檢測,選擇檢測靈敏度較高的熱啟動Taq酶。


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