實時熒光定量PCR儀  熒光定量PCR檢測儀-PCR檢測儀原理

PCR檢測儀是一種實時檢測反應(yīng)的分析儀器。事實上，養(yǎng)殖業(yè)的朋友或家里養(yǎng)寵物的朋友對它并不陌生。PCR檢測儀有很多用途，可以檢測各種動物病害，包括魚蝦病害和非洲豬瘟。PCR檢測儀是現(xiàn)在常用的監(jiān)測儀器，PCR檢測儀適用于基于能力的儀器PCR檢測儀在產(chǎn)物生成過程中，可以對產(chǎn)物進(jìn)行任何實時標(biāo)記熒光反應(yīng)PCR病原體、突變等檢測。

PCR檢測儀封閉的反應(yīng)系統(tǒng)將污染降到低。PCR檢測儀可以對SNP細(xì)胞分析與快速篩選、細(xì)胞分析與快速篩選、RNA水平檢測與量化等。所以PCR檢測儀可以廣泛用在各個領(lǐng)域，可以應(yīng)用在轉(zhuǎn)基因監(jiān)測、水體監(jiān)測、動物疫病等。非洲豬瘟檢測就可以使用PCR檢測儀進(jìn)行檢測。

PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板，從而進(jìn)入平臺期。在傳統(tǒng)的PCR 中，常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應(yīng)的擴(kuò)增產(chǎn)物，因此用此終點法對PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處。在real-time Q-PCR中，對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實時的監(jiān)測和連續(xù)地分析擴(kuò)增相關(guān)的熒光信號，隨著反應(yīng)時間的進(jìn)行，監(jiān)測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲 線。在PCR反應(yīng)早期，產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別，而后熒光的產(chǎn)生進(jìn)入指數(shù)期、線性期和平臺期，因此可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點 上來檢測PCR產(chǎn)物的量，并且由此來推斷模板的含量。為了便于對所檢測樣本進(jìn)行比較，在real-time Q-PCR反應(yīng)的指數(shù)期，首先需設(shè)定一定熒光信號的域值，一般這個域值(threshold)是以PCR反應(yīng)的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號 (baseline)，熒光域值的缺省設(shè)置是3~15個循環(huán)的熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。如果檢測到熒光信號超過域值被認(rèn)為是真 正的信號，它可用于定義 樣本的域值循環(huán)數(shù)(Ct)。Ct值的含義是:每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達(dá)到設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。研究表明，每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的 對數(shù)存在線性關(guān)系，起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，因此只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出該樣 品的起始拷貝數(shù)。