熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶說(shuō)明書(shū)

熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶設(shè)計(jì)用于增強(qiáng)DNA擴(kuò)增的特異性、敏感性和產(chǎn)量。

使用該酶可在室溫配制反應(yīng)體系，使用非常方便。熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶是一種重組Taq DNA 聚合酶，蛋白分子氨基酸殘基上增加了熱不穩(wěn)定的封閉基團(tuán)。該酶在室溫下沒(méi)有活性，避免形成引物二聚體和非特異性延伸。從而增加DNA擴(kuò)增的特異性。95℃加熱4分鐘可恢復(fù)酶活性?；罨拿妇哂信c熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶相同的功能：催化5’→3’方向合成DNA、無(wú)可檢測(cè)的3’→5’校正外切酶活性、具有較低的5’→3’外切酶活性。該酶還具有脫氧核糖核酸酶轉(zhuǎn)移活性，在PCR產(chǎn)物的3’-端多加1個(gè)腺嘌呤。活化前檢測(cè)不到這些活性。此產(chǎn)品特點(diǎn)是：

1. 高產(chǎn)量擴(kuò)增復(fù)雜模板。

2. 不需要95℃加熱4分鐘即可激活酶活性。

3. PCR特異性高-降低錯(cuò)配效應(yīng)和減少引物二聚體的生成。

4. 增強(qiáng)的PCR敏感性。

5. 使用方便，室溫配制PCR反應(yīng)體系。

6. 擴(kuò)增產(chǎn)物具有3’-dA突出末端。

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

注意：

以下舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)系統(tǒng)，僅供參考。實(shí)際反應(yīng)條件因模板、引物等的結(jié)構(gòu)不同而各異，需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物長(zhǎng)短等具體情況，設(shè)定反應(yīng)條件。10×HotMaster Taq Buffer 中含有Mg2+，配有濃度為15 mM MgCl2 。實(shí)際PCR反應(yīng)可因模板等的不同酌情向反應(yīng)體系中添加適量的Mg2+ ，設(shè)置的反應(yīng)體系。該酶適延伸溫度為65℃，可在60℃-70℃之間調(diào)整。

以人基因組DNA為模板，護(hù)增1kb的片段

1. 反應(yīng)體系的建立：50μL反應(yīng)體系如下（可根據(jù)比例放大或縮小反應(yīng)體系）：

2. PCR反應(yīng)循環(huán)的設(shè)置：

3. 結(jié)果檢測(cè)：反應(yīng)結(jié)束后取5 μl 反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

應(yīng)用

1. 啟動(dòng)PCR。

2. 高產(chǎn)量擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)3kb片段。

3. RT-PCR

4. 特異性擴(kuò)增復(fù)雜cDNA和基因組模板。

5. 擴(kuò)增低拷貝DNA模板。

6. 實(shí)時(shí)PCR。

7. 多重PCR。

8. 制備TA克隆用PCR產(chǎn)物。