實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）是一種快速的PCR方法，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究和臨床診斷中。相對(duì)于傳統(tǒng)PCR方法，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀具有諸多優(yōu)勢(shì)，可以解決傳統(tǒng)PCR方法的很多局限性。

首先，實(shí)時(shí)熒光定量PCR可以提供準(zhǔn)確的定量結(jié)果。傳統(tǒng)PCR方法只能通過檢測(cè)末端PCR產(chǎn)物進(jìn)行定性分析，無法準(zhǔn)確測(cè)量目標(biāo)DNA或RNA的起始量。而實(shí)時(shí)熒光定量PCR可以通過監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)實(shí)時(shí)產(chǎn)生的熒光信號(hào)，實(shí)時(shí)定量目標(biāo)分子的起始量。這使得實(shí)時(shí)熒光定量PCR可以用于定量比較不同樣本中目標(biāo)分子的多少，以及測(cè)定樣本中目標(biāo)分子的數(shù)量。

其次，實(shí)時(shí)熒光定量PCR具有高靈敏度和廣量程。相對(duì)于傳統(tǒng)PCR方法，實(shí)時(shí)熒光定量PCR可以檢測(cè)更低濃度的目標(biāo)分子。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的熒光檢測(cè)系統(tǒng)可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)的信號(hào)，并準(zhǔn)確測(cè)量樣本中目標(biāo)分子的起始量。同時(shí)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀可以通過調(diào)整熒光探針的濃度和PCR循環(huán)程序來擴(kuò)大PCR的線性動(dòng)態(tài)范圍，從而可以同時(shí)檢測(cè)濃度差異較大的目標(biāo)分子。

第三，實(shí)時(shí)熒光定量PCR可以減少非特異性擴(kuò)增的問題。傳統(tǒng)PCR反應(yīng)中，可能會(huì)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的問題，導(dǎo)致結(jié)果解讀不準(zhǔn)確。而實(shí)時(shí)熒光定量PCR通過使用熒光探針或SYBR Green等熒光染料可以直接監(jiān)測(cè)擴(kuò)增的特異性，減少非特異性擴(kuò)增的可能性。熒光探針可以通過與靶DNA或RNA的特定序列結(jié)合，并產(chǎn)生熒光信號(hào)，從而準(zhǔn)確測(cè)量目標(biāo)分子的起始量。SYBR Green則可以與PCR反應(yīng)產(chǎn)物結(jié)合并發(fā)光，由于其選擇性結(jié)合特定序列的能力，能夠區(qū)分特異性擴(kuò)增和非特異性擴(kuò)增。

此外，實(shí)時(shí)熒光定量PCR還具有操作簡(jiǎn)便、高通量和高度自動(dòng)化的特點(diǎn)。相對(duì)于傳統(tǒng)PCR方法，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需等待PCR反應(yīng)結(jié)束后再進(jìn)行分析，減少了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的高通量特點(diǎn)使得可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣本，提高實(shí)驗(yàn)效率。同時(shí)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀配備的軟件可以自動(dòng)分析和解讀熒光信號(hào)，減少了人為判斷的主觀性，提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

在實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的發(fā)展中，也不斷出現(xiàn)更多的創(chuàng)新和改進(jìn)。例如，支持多樣本同時(shí)檢測(cè)的高通量PCR技術(shù)，能夠提高實(shí)驗(yàn)效率并節(jié)省成本。另外，引入新的核酸分析技術(shù)，如數(shù)字PCR（dPCR）技術(shù)和環(huán)狀DNA聚合酶擴(kuò)增（RCA）技術(shù)，可以進(jìn)一步提高PCR的靈敏度和準(zhǔn)確性，擴(kuò)大PCR的應(yīng)用范圍。