生命復(fù)雜又神奇,人們一直想解開這個(gè)大自然的謎題,而復(fù)雜的分子機(jī)理卻限制住了人們熱切的求知欲。里程碑式的分子生物學(xué)技術(shù)——PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),polymerase chain reaction)技術(shù)可以說開創(chuàng)了生物學(xué)的新時(shí)代,帶領(lǐng)著我們走上了現(xiàn)代分子生物學(xué)的巨船。讓我們向它的開創(chuàng)者——Kary Mullis致以我們最高的尊崇!那么我們不禁要問,PCR技術(shù)到底有什么神奇的地方值得我們將其的地位擺的如此之高呢?
我們先來了解一下DNA的相關(guān)信息。DNA是雙螺旋結(jié)構(gòu),通過堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式結(jié)合,A與T配對(duì),C與G配對(duì),從而將兩條鏈牢牢“鎖”在一起。當(dāng)DNA進(jìn)行復(fù)制時(shí),雙鏈解開,以其中任意一條鏈為模板,以游離的脫氧核苷酸——即ATP、GTP、UTP、CTP為原料,沿著5’端向3’端拼湊延伸,直到延伸成一條完整單鏈與模板單鏈形成一個(gè)新的雙螺旋DNA結(jié)構(gòu)。生命體的秘密就藏在這一段段DNA分子中,只有得到了大量DNA才能供給研究分析。
PCR技術(shù)就是一種生物體外進(jìn)行大量DNA復(fù)制的技術(shù),簡單快速就可將我們需要的DNA序列進(jìn)行指數(shù)級(jí)擴(kuò)增,大大推動(dòng)了了分子生物領(lǐng)域的研究進(jìn)度。想要學(xué)習(xí)PCR技術(shù)就必須知道PCR技術(shù)的三個(gè)核心組分,三個(gè)關(guān)鍵步驟。
三個(gè)核心組分——引物、dNTP和DNA連接酶。引物就是一段長15-20個(gè)堿基的DNA片段,引物根據(jù)我們的目的DNA序列進(jìn)行特定設(shè)計(jì),達(dá)到與目的DNA序列互補(bǔ),并能結(jié)合到目的DNA序列的特定位置。等引物粘合到序列上后,dNTP即脫氧核糖核苷酸則排上用場,它是DNA復(fù)制的原料,DNA連接酶將一個(gè)個(gè)脫氧核苷酸連接起來,沿著引物繼續(xù)向后延伸。
而三個(gè)關(guān)鍵步驟就是變性、退火和延伸。變性就是加熱PCR混合后的體系,使雙螺旋結(jié)構(gòu)的DNA解旋分離成兩條單鏈。退火溫度因引物不同而不同,當(dāng)冷卻PCR混合體系至55℃到70℃不等時(shí),DNA單鏈重新恢復(fù)粘性,與引物結(jié)合。延伸就是DNA聚合酶利用dNTP原料,沿著引物將序列填充補(bǔ)齊,完成DNA復(fù)制過程。
現(xiàn)在,PCR技術(shù)已經(jīng)滲透到醫(yī)藥、食品、農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)等眾多行業(yè)中,應(yīng)用相當(dāng)廣泛。河北三獅生物科技有限公司經(jīng)營各種基礎(chǔ)科研試劑,推出普通PCR和Real-time PCR全線產(chǎn)品,更有全自動(dòng)核酸提取儀,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀各種儀器和多款“明星”爆品,為您打造核酸檢測(cè)整體解決方案。
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