熱啟動(dòng)Taq酶   隨著分子生物學(xué)研究發(fā)展的不斷廣泛和深入，PCR已成為一門相當(dāng)成熟的常規(guī)技術(shù)，而熱聚合酶（即Taq酶）的合理選擇是PCR成敗與否的一個(gè)關(guān)鍵因素。目前市面上有多種Taq酶，能夠滿足多方面的實(shí)驗(yàn)需要。那么，如何選擇合適的Taq酶？我們?cè)谶@里總結(jié)了三種Taq酶的性質(zhì)和用途，方便用戶選擇。

高特異性Taq酶

可高度特異性地?cái)U(kuò)增所需的片段是PCR基本的要求，影響PCR特異性的因素很多，包括模板、引物性質(zhì)及質(zhì)量、反應(yīng)條件的控制等等，而高特異性Taq酶的出現(xiàn)大大減少了摸條件這一繁瑣的實(shí)驗(yàn)過程，也為PCR產(chǎn)物快速有效的純化（PCR產(chǎn)物直接純化）打下了基礎(chǔ)。這類酶典型的代表是熱啟動(dòng)Taq酶。

大家都知道，在PCR第 一個(gè)循環(huán)變性之前，有一個(gè)升溫的過程，引物和模板會(huì)有一些非特異性配對(duì)，如果這時(shí)Taq酶發(fā)揮活性，就很容易產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增，由于循環(huán)初期模板量非常少，產(chǎn)生的非特異性條帶經(jīng)過后面的指數(shù)擴(kuò)增，就會(huì)嚴(yán)重干擾目的片段的擴(kuò)增，甚至導(dǎo)致特異性條帶不能擴(kuò)出。而熱啟動(dòng)Taq酶是需經(jīng)過高溫才能激活的酶，因此在初始循環(huán)的變性之前它沒有活性，不會(huì)產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增，這就大大提高了PCR擴(kuò)增的特異性。

高保真Taq酶

下游應(yīng)用為基因篩選、測(cè)序、突變檢測(cè)，分子診斷等等的用戶，往往對(duì)PCR保真性要求很高，保真性的一個(gè)通用標(biāo)準(zhǔn)是錯(cuò)配率，錯(cuò)配率越低保真性越好。普通Taq酶的錯(cuò)配率在2-5X10-5堿基/循環(huán)數(shù)，而高保真Taq酶錯(cuò)配率可達(dá)10-6數(shù)量級(jí)，大大降低了出錯(cuò)的可能。其原理主要是因?yàn)楦弑Ｕ鎀aq酶具有3‘到5’核酸外切酶（Proofreading）的活性，擴(kuò)增途中如果產(chǎn)生了錯(cuò)配的堿基，它可以將其切掉，從而保證了擴(kuò)增的準(zhǔn)確性。

需要提醒用戶的是由于此酶具有核酸外切酶功能，往往擴(kuò)增效率低一些，有的還容易降解引物，且產(chǎn)物一般不宜用TA或UA克隆法克隆。目前市面上主要有兩類產(chǎn)品，一類是混合型的高保真酶，將帶有Proofreading活性的酶與普通Taq酶（用于提高擴(kuò)增效率）混合起來，錯(cuò)配率在8-9X10-6堿基/循環(huán)數(shù)。如果要求更高的保真度，就要選擇單一型的高保真酶。

高耐熱性Taq酶 

對(duì)于有些模板變性溫度較高，需要時(shí)間較長的用戶，可能要求高耐熱性Taq酶。